Effet du sévoflurane sur la réponse oxydative des polynucléaires neutrophiles humains stimulés in vitro - 30/08/14
Resumen |
Introduction |
Les agents anesthésiques halogénés sont capables de modifier la réponse oxydative des polymorphonucléaires neutrophiles (PMNs) [1]. Nous avons évalué les effets du sévoflurane (SEVO) sur la libération de la myéloperoxidase (MPO) et la production des espèces réactives de l’oxygène (ERO) par les PMNs humains stimulés ex vivo dans le sang complet.
Matériel et méthodes |
Après l’approbation du comité d’éthique et l’obtention d’un consentement éclairé, des échantillons de sang sont prélevés chez 10 volontaires sains. Le sang est incubé pendant 1h sous air, sous 1 CAM (2,3 %) ou 2 CAM (4,6 %) de SEVO. Les PMNs sont stimulés de manière artificielle avec une association de cytochalasine B (CB, 5μg.mL−1) et de N-formyl-méthionyl-leucyl-phénylalanine (fMLP, 10−6M) ou avec du phorbol-myristate-acétate (PMA, 8×10−7M). Une méthode de stimulation des PMNs mimant l’effet de deux médiateurs naturels de la réponse inflammatoire est également testée avec une association de lipolysaccharide (LPS, 10μg.mL−1) et de TNF-α (10ng.mL−1). Des conditions contrôles sans stimulation sont réalisées parallèlement aux tests de stimulation. Le dosage de la MPO active libérée par les PMNs est effectué par la technique SIEFED (Specific Immunological Extraction Followed by Enzymatic Detection) consistant en une révélation de l’activité peroxydasique de l’enzyme après son immunocapture hors du plasma [2]. La mesure de la production des ERO par chimiluminescence est effectuée dans le sang complet en présence de L-012 [3]. Les résultats obtenus sous SEVO sont comparés aux tests correspondants effectués à l’air. L’analyse statistique utilise le test de Kruskal-Wallis avec une significativité à p<0,05.
Résultats |
Effet du SEVO sur la libération de MPO active : 1 CAM de SEVO augmente (p<0,05) la libération de MPO active lors de la stimulation des PMNs avec l’association CB+fMLP et avec le PMA mais diminue (p<0,05) la libération de MPO active par les PMNs non stimulés et par ceux stimulés avec l’association LPS+TNF-α. À 2 CAM, le SEVO maintient une libération élevée (p<0,05) de MPO active par les PMNs stimulés avec CB+fMLP et réduit (p<0,05) l’enzyme active en l’absence de stimulation et lors de l’exposition au LPS+TNF-α. Effet du SEVO sur la production d’ERO : 1 CAM de SEVO augmente (p<0,05) la production des ERO lors de la stimulation des PMNs avec l’association CB+fMLP. À 2 CAM, cette production d’ERO par les PMNs reste soutenue (p<0,05) lors de l’exposition à l’association CB+fMLP et est légèrement augmentée (p<0,05) en présence de PMA.
Discussion |
Le SEVO augmente la réponse oxydative des PMNs dans des conditions de stimulation artificielle. Par contre, sans stimulation ou en présence de médiateurs naturels de la réponse inflammatoire, le SEVO diminue la réponse oxydative des PMNs humains en réduisant la dégranulation de la MPO active.
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Vol 33 - N° S2
P. A108 - septembre 2014 Regresar al número
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