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Vectorisation de molécules biologiques dans Candida albicans grâce au peptide de transduction MD-ZEBRA - 05/06/15

Doi : 10.1016/j.mycmed.2015.02.021 
Roberta Marchione a, David Daydé a, Jean-Luc Lenormand a, Muriel Cornet a, b,
a Laboratoire TheREx, TIMC-IMAG, CNRS-Université Grenoble Alpes, Grenoble, France 
b Laboratoire de Parasitologie-Mycologie, CHU de Grenoble, Grenoble, France 

Auteur correspondant.

Resumen

Introduction

L’identification de nouvelles cibles pour le développement de thérapies antifongiques efficaces et non toxiques pour les cellules humaines reste un défi majeur. De plus, la paroi et la membrane fongique constituent des obstacles à l’internalisation de molécules inhibitrices. Nous avons développé à partir du facteur de transcription ZEBRA du virus Epstein-Barr un peptide de pénétration cellulaire nommé MD. Nous avons montré précédemment que MD était capable de traverser la membrane cellulaire des cellules eucaryotes et de favoriser l’internalisation de molécules cargos auxquelles il était fusionné [1].

Objectifs de l’étude

Montrer que le peptide MD possède la capacité de traverser la paroi et la membrane de Candida albicans et qu’il permet de véhiculer efficacement des protéines dans le cytoplasme.

Méthodes

Des protéines recombinantes, contenant la séquence de pénétration cellulaire fusionnée à la protéine reportrice eGFP, ont été produites dans un système procaryote et ensuite purifiées par chromatographie d’affinité. L’internalisation dans C. albicans a été vérifiée par microscopie confocale et la cinétique a été analysée par FACS. Après internalisation des protéines recombinantes, la viabilité cellulaire a été évaluée par des mesures de CFU et OD600nm.

Résultats

L’analyse par microscopie confocale démontre que le peptide MD est capable de traverser la paroi et la membrane cellulaire et de transférer la protéine eGFP dans le cytoplasme de la levure. Le processus d’internalisation est concentration – et temps – dépendant. Après 2heures d’incubation avec les protéines recombinantes, environ 70 % des levures apparaissent et la fluorescence est détectée jusqu’au centre du cytoplasme. Aucun effet toxique n’est associé au processus d’internalisation [2].

Conclusion

Le peptide MD représente un nouveau système de vectorisation de protéines dans C. albicans. Les résultats obtenus ouvrent de nouveaux champs d’investigation pour l’utilisation de ce système dans la validation de nouvelles stratégies thérapeutiques ainsi que pour des analyses fonctionnelles de la pathogénicité de C. albicans.

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Vol 25 - N° 2

P. e103-e104 - juin 2015 Regresar al número
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