C. glabrata est capable de survivre et de se multiplier à l’intérieur des phagocytes. Cette caractéristique implique que la levure ait développé des mécanismes d’échappement aux systèmes de défense de la cellule hôte et notamment à la production d’espèces réactives de l’oxygène mise en place par les phagocytes. L’étude de cette réaction vis-à-vis de C. glabrata n’a été que très peu explorée et fait l’objet du projet en cours.

Nous avons développé des protocoles permettant de différencier la lignée PLB-985 en cellules de type neutrophile après traitement au DMSO ou en macrophages en utilisant l’1α25-Dihydroxyvitamine-D3 et le Phorbol myristate acetate (PMA).

Pour les expériences de phagocytose, la souche C. glabrata CBS138 a été utilisée. La mesure de ROS global a été effectuée par luminométrie durant une phagocytose de 30minutes avec un MOI de 0,5. La phagocytose a été testée avec les levures préincubées ou non avec du complément. Le burst oxydatif intraphagosomal a été mesuré par cytométrie en flux, induit lors de la phagocytose de particules marquées (S. cerevisiae ou C. glabrata mort) par le Dichlorodihydrofluoresceine (DCFH2).

Les PLB-985 macrophages ont un phénotype adhérent et expriment CD11b et CD14 contrairement aux PLB-985 neutrophiles. Le burst oxydatif intraphagosomal est plus élevé chez le neutrophile que chez le macrophage. Chez le neutrophile, la production intraphagosomale de ROS est similaire après phagocytose de particules de S. cerevisiae ou C glabrata. Avec les PLB-985 neutrophiles, la phagocytose de C. glabrata vivante indique une corrélation entre l’état d’opsonisation de la levure et la production globale (intracellulaire et extracellulaire) de ROS. Cependant, le seuil de détection par luminométrie reste pour l’instant trop élevé pour permettre la détection de ROS global produit par les macrophages.

Le développement de nouveaux outils est nécessaire pour analyser le stress oxydant phagosomal dans la défense immunitaire contre C. glabrata. Parmi les prochaines étapes de ce travail, nous envisageons d’étudier le rôle du radical HOCl dans le stress oxydant subi par C. glabrata. Pour cela, une souche de C. glabrata exprimant la GFP au niveau de la paroi est en cours de construction.