Introduction : La vectorisation de drogues dans les cellules tumorales permet l’utilisation de molécules hautement toxiques tout en limitant les effets secondaires. Le RAFT-[c(-RGDfK-)]₄ est développé dans le but de vectoriser des drogues dans les cellules possédant l’intégrine _vβ₃ dont l’expression est spécifique des néovaisseaux et de certaines cellules tumorales, par reconnaissance du motif peptidique RGD. Notre objectif est de définir les propriétés et le mécanisme d’internalisation du RAFT-[c(-RGDfK-)]₄ afin d’améliorer la vectorisation de drogues in vivo.

Méthodes : Par microscopie électronique, l’interaction RAFT- [c(-RGDfK-)]₄/intégrine _vβ₃ a été observée et comparée à celle du monomère c(-RGDfK-). Les affinités respectives des molécules ont été déterminées par FCS (Fluorescence Correlation Spectroscopy). L’internalisation et le trafficking cellulaires du RAFT-[c(-RGDfK- )]₄ ont été étudiés par microscopie confocale, par colocalisation avec des marqueurs de compartiments cellulaires spécifiques. Enfin, grâce à des constructions chimiques originales, le relargage et le trafic intracellulaire du peptide pro-apoptotique (KLAKLAK)₂ et de son vecteur ont été observés par FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer).

Résultats : Grâce à sa multivalence, le RAFT-[c(-RGDfK-)]₄ est capable de lier deux intégrines simultanément, contrairement au c (-RGDfK-). Son affinité pour l’intégrine en solution est de 3,87 ± 1,42 nM, soit 10 fois supérieure à celle du monomère (41,70 ± 17,13 nM). Internalisé avec son récepteur l’intégrine _vβ₃ dans des vésicules de clathrine, le RAFT-[c(-RGDfK-)]₄ est ensuite transporté en partie jusqu’au Golgi ou peut être dégradé dans des vésicules lysosomales. Couplé au RAFT-[c(-RGDfK-)]₄, le peptide apoptotique (KLAKLAK)₂ est internalisé et trafique jusqu’aux mitochondries, entraînant la mort cellulaire.

Conclusions : Le RAFT-[c(-RGDfK-)]₄ semble donc internalisé avec l’intégrine _vβ₃, probablement après regroupement des intégrines en surface, par vésicules de clathrine. Il est ensuite pour partie transporté vers l’appareil de Golgi et pour partie dégradé. Possédant une meilleure affinité pour son récepteur que le monomère actuellement en développement clinique, le RAFT-[c(-RGDfK-)]₄ permet également l’adressage et l’internalisation de substances toxiques actives et fonctionnelles dans les cellules ciblées.