A sensitive and accurate LC/MS method for the determination of elbasvir (ELB) and grazoprevir (GZP) in human plasma was established using daclatasvir (DCT) as an internal standard. The analytes were separated on a Waters Spherisorb phenyl column (150mm×4.6mm ID, 5μm particle size) maintained at 40°C±2°C. Gradient elution, at a flow rate of 0.8mLmin⁻¹, was used. The mobile phase consists of 90% of acetonitrile mixed to 10% of a 5mM ammonium formate buffer (+0.1% v/v of trimethylamine, pH was adjusted to 3.2 by formic acid) as phase A and 10% of acetonitrile mixed to 90% of the same buffer as phase B. Liquid–liquid extraction with ethyl acetate solvent was used to recuperate compounds from plasma. The method was validated over a concentration range of 2 and 100ng/mL for GZP and between 1 and 50ng/mL for ELB. The intra- and inter-day precision and accuracy of the quality control samples at low, medium, and high concentration levels exhibited relative standard deviations (RSD)<15%, and the accuracy values ranged from 94.2 to 107.8%. The robustness of the method was established using a two-level full factorial design.

Une méthode sensible et précise pour la détermination de l’elbasvir (ELB) et du grazoprévir (GZP) dans le plasma humain par LC/MS a été établie en utilisant le daclatasvir (DCT) comme étalon interne. Les analytes ont été séparés sur une colonne Waters Spherisorb phényle (ID 150mm×4,6mm, taille de particule 5μm) maintenue à 40°C±2°C. Une élution par gradient, à un débit de 0,8mLmin⁻¹, a été utilisée. La phase mobile est constituée de 90 % d’acétonitrile mélangé à 10 % d’un tampon formiate d’ammonium 5mM (0,1 % v/v de triméthylamine, pH ajusté à 3,2 par l’acide formique) comme phase A et 10 % d’acétonitrile mélangé à 90 % du même tampon comme phase B. Une extraction liquide–liquide avec un solvant acétate d’éthyle a été utilisée pour récupérer les composés du plasma. La méthode a été validée sur une gamme de concentrations comprise entre 2 et 100ng/mL pour le GZP et entre 1 et 50ng/mL pour l’ELB. La précision et l’exactitude intra- et inter-journalières des échantillons de contrôle qualité à des niveaux de concentration faibles, moyens et élevés présentaient des écart-types relatifs (RSD)<15 % et les valeurs d’exactitude variaient de 94,2 à 107,8 %. La robustesse de la méthode a été établie à l’aide d’un plan factoriel complet à deux niveaux.