This work deals with the development, validation and application of an HPLC-DAD method for the determination of a ternary mixture containing amoxicillin (AX), metronidazole (MZ) and the proton pump inhibitor rabeprazole sodium (RB). This triple therapy is used for treatment of Helicobacter pylori infection. Effective chromatographic separation between the three drugs was achieved using Thermo Hypersil BDS-C8 (4.6×250mm, 5μm particle size) column and a mobile phase composed of phosphate buffer pH 7 and acetonitrile (70: 30, by volume). The mobile phase was pumped isocratically at a flow rate of 1 mL/min. Quantification of the analytes was based on measuring their peak areas at 230nm for both AX and RB, and at 319nm for MZ. AX, MZ and RB eluted at retention times 2.36, 3.55 and 8.72min respectively. The reliability and analytical performance of the proposed HPLC procedure were statistically validated with respect to linearity, ranges, precision, accuracy, selectivity, robustness, detection and quantification limits. The linear dynamic ranges were 25–250, 25–250 and 5–50μg/mL for AX, MZ and RB respectively with correlation coefficients>0.9998. The validated method was successfully applied to the analysis of several laboratory-prepared mixtures as well as simulated intestinal fluid samples spiked with the three drugs.

Ce travail porte sur le développement, la validation et l’application d’une méthode HPLC-DAD pour la détermination d’un mélange ternaire contenant de l’amoxicilline (AX), du métronidazole (MZ) et l’ inhibiteur de la pompe à protons, le rabéprazole sodique (RB). Cette trithérapie est utilisé pour le traitement de l’infection à H. pylori. Une séparation chromatographique efficace entre les trois médicaments a été obtenu à l’aide d’une colonne Thermo Hypersil BDS-C8 (mm, taille de 4,6×250mm ; particules 5μm) et d’une phase mobile composée d’un tampon phosphate pH 7 et d’acétonitrile (70 : 30, en volume). La phase mobile avait un débit de 1mL/min en mode isocratique. La quantification des analytes a été basée sur la mesure de l’ aires des pics à 230nm pour les AX et RB, et à 319nm pour MZ. Les composés AX, MZ et RB ont été élués aux temps de rétention respectivement de 2,36, 3,55 et 8,72min. La fiabilité et la performance analytique de la procédure de HPLC proposé ont été statistiquement validées par rapport aux limites de linéarité, gammes, précision, exactitude, sélectivité, robustesse, et limites de détection et de quantification. Les plages dynamiques linéaires étaient de 25–250, 25–250 et 5–50μg/ml pour AX, MZ et RB respectivement avec des coefficients de corrélation >0,9998. La méthode validée a été appliquée avec succès à l’analyse de plusieurs mélanges préparés en laboratoire ainsi que des échantillons de fluides intestinaux simulés dopés avec les trois médicaments.