Le contrôle-qualité des greffons cornéens nécessite une détermination précise de la Densité Cellulaire Endothéliale (DCE). Le dénombrement des CE se fait actuellement par « dilatation osmotique » au NaCl 0,9 % donnant des résultats très imparfaits. Notre objectif est de remplacer cette technique par une coloration vitale non toxique permettant de visualiser les CE aussi parfaitement qu’avec le Rouge Alizarine (RA), non utilisable car toxique mais servant de référence.

Après recherche bibliographique, nous avons sélectionné 30 colorants susceptibles de teinter les CE. Une paire de cornées animales de 3 espèces différentes (porc, veau, lapin) a été exposée pendant 1 minute avec une solution de l’un de ces trente colorants (solution commerciale ou dilution à 1 %, puis dilutions successives à 0,5, 0,1, 0,05, 0,01 %), puis observée au microscope à fond clair et en fluorescence. Les résultats ont été comparés aux résultats obtenus avec le RA et le type de coloration notée (bordures cellulaires, cytoplasmes, noyaux). Les colorants permettant un dénombrement aussi précis que le RA ont fait l’objet d’un test de toxicité au Bromure de 3- (4–5 diméthylthiazol-2-yl)-diphényl tétrazolium sur CE en culture.

Six des 30 colorants se sont révélés intéressants (Hémalun, Rose Bengale, Rouge Nucléaire, Rouge Congo, Bleu Evans et Chicago Sky Blue). Les colorants de la famille des diazoïques à très faible concentration (Rouge Congo, Bleu Evans et Chicago Sky Blue) colorent le contour des CE aussi parfaitement que le RA et mettent en évidence les noyaux des cellules altérées. La toxicité de ces composés semble par ailleurs faible.

Nos travaux suggèrent que les colorants diazoïques pourraient avoir un intérêt majeur dans l’appréciation de la qualité des greffons cornéens en donnant des indications morphologiques et fonctionnelles sur l’endothélium

L’évaluation des propriétés tinctoriales et de la toxicité de ces candidates colorants sur des cornées humaines scientifiques ex vivo est en cours ainsi que l’évaluation de la toxicité post greffe sur un modèle animal avant d’envisager une évaluation en banque de cornée.