O88 Implication de l’isoforme neuronale de la NO synthase dans la sécrétion insulinique des îlots pancréatiques humains - 06/04/09
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Résumé |
Introduction |
La NO synthase neuronale (nNOS) peut, chez le rat, moduler à la fois l’amplitude et la cinétique de la sécrétion d’insuline. Notre objectif est de confirmer son expression dans les cellules β pancréatiques humaines et d’évaluer sa fonctionnalité.
Matériels et méthodes |
L’expression de la nNOS a été étudiée dans des extraits d’îlots humains par RT-PCR quantitative ainsi que par Western Blot. Sa localisation cellulaire a été précisée par immunofluorescence et microscopie confocale. Enfin, la sécrétion insulinique a été évaluée sur 10 îlots pendant 90 minutes, en présence de concentrations croissantes de glucose et d’inhibiteurs pharmacologiques de l’enzyme, le Nω-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) et le 7-nitroindazole (7-NI), plus sélectif de l’isoforme neuronale.
Résultats |
La nNOS est exprimée dans les îlots pancréatiques humains tant au niveau ARN messager qu’au niveau protéique. Elle est préférentiellement cytoplasmique, mais aussi nucléaire et mitochondriale, et co-localise avec les granules de sécrétion d’insuline. Sur le plan fonctionnel, l’inhibition de l’activité nNOS par le L-NAME et le 7-NI stimule de façon dose-dépendante la sécrétion d’insuline induite par le glucose. À 8,3 mM de glucose, la sécrétion d’insuline est de 24,3±1,9 ng/mL/10 îlots/90 min et est amplifiée à 29±3,6 et 34,5±3,37 en présence de respectivement 5mM (non significatif) et 10mM (p<0,01) de L-NAME, et à 36,2±3,2 et 37±3,2 avec 100μM (p<0,01) et 200μM (p<0,01) de 7-NI. La sécrétion d’insuline induite par 16,7 mM de glucose atteint 34,8±2,9 ng/mL/10 îlots/90 min et augmente à 43,3±3,5 et 51,5±6,1 avec 5 mM (p<0,05) et 10mM (p<0,05) de L-NAME, et à 53,1±4,9 et 68,4±5,6 avec 100μM (p<0,01) et 200μM (p<0,001) de 7-NI.
Discussion |
Des résultats similaires avaient précédemment été retrouvés chez le rat. D’autres expériences associant inhibiteurs de l’activité cytochrome c réductase et donneurs de NO sont nécessaires pour préciser le rôle des différentes activités catalytiques de l’enzyme.
Conclusion |
La nNOS est exprimée dans les cellules β humaines et intervient dans la régulation de la sécrétion insulinique glucose-dépendante.
Le texte complet de cet article est disponible en PDF.
Vol 35 - N° S1
P. A23 - mars 2009 Retour au numéro
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