L’importance croissante de l’évaluation des anomalies génétiques dans le diagnostic et la prise en charge thérapeutique des cancers colorectaux, associée à une reconnaissance du caractère cancérigène du formol engage de nombreux laboratoires de pathologie dans une démarche de substitution du formol. A ce titre, le nouveau fixateur RCL2^®-CS100 représente une alternative aux fixateurs classiques. L’objectif du travail était d’évaluer le fixateur RCL2^®-CS100 au plan morphologique, immunohistochimique et moléculaire (qualité et quantité des acides nucléiques ARN et ADN).

Douze fragments tumeurs coliques (adénocarcinomes) ont été cryopréservées, fixées en formol et en RCL2^®-CS100. L’immunohistochimie a été réalisée avec les anticorps classiquement utilisés en pathologie digestive à des fins diagnostiques (CK7, CK20, MLH1, MSH2, MSH6, PMS2, CDX2 et villine) et comparée aux immunomarquages obtenus après fixation en formol. Les acides nucléiques des tumeurs cryopréservées et des tumeurs fixées en RCL2^®-CS100 ont été extraits puis quantifiés et qualifiés, sur gel d’agarose pour l’ADN, et sur puce Agilent pour les ARN.

La qualité morphologique des tissus a permis le diagnostic aisé de l’ensemble des tumeurs, malgré quelques rétractions tissulaires. De même, les résultats immunohistochimiques étaient comparables, pour tous les anticorps testés, quel que soit le mode de fixation (formol ou RCL2^®-CS100). En dépit d’une légère baisse qualitative, évaluée après migration sur gel d’agarose, l’ADN des échantillons tumoraux fixés en RCL2^®-CS100 était exploitable. Ainsi, à partir de l’ADN extrait des tumeurs coliques, nous avons pu évaluer le statut mutationnel du gène KRAS par amplification et séquençage de l’exon 2 et leur phénotype RER par recherche d’instabillité des microsatellites. L’analyse quantitative des ARN a permis de montrer une baisse significative des rendements d’extraction (-40 %) par rapport aux mêmes tumeurs cryopréservées. L’analyse qualitative des ARN a mis en évidence une dégradation se traduisant par une perte d’environ 2 points de RIN (RNA Integrity Number) : les RIN moyens étaient et 6,3 versus 8,6 pour les tumeurs cryopréservées. Cependant, cette qualité reste compatible pour une analyse des ARN par RT-PCR et pour l’analyse du transcriptome sur puce pan-génome.

Le RCL2^®-CS100 est un fixateur non-formolé qui permet une étude diagnostique anatomopathologique morphologique et immunohistochimique des adénocarcinomes colorectaux. En outre, la préservation des acides nucléiques ouvre de nouvelles perspectives pour l’analyse moléculaire de petites lésions, pour lesquelles la cryo-préservation est impossible et la fixation classique délétère pour les acides nucléiques.