Les levures du genre Malassezia ont aujourd’hui un intérêt accru en pathologie humaine. On en dénombre 14 espèces. L’identification phénotypique de ces espèces pose parfois des problèmes d’interprétation, elle est donc de plus en plus complétée par l’identification moléculaire. Notre travail consiste en l’optimisation de la PCR et la caractérisation moléculaire des espèces de Malassezia au laboratoire de parasitologie- mycologie de l’ HCA, Alger.

Ce travail a porté sur 15 souches de Malassezia provenant de malades et de sujets sains. L’isolement se fait par culture et l’identification phénotypique par la recherche de l’uréase, de la catalase, de l’assimilation des Tween 20, 40 60,80 et le test à esculine. L’ADN est extrait à partir des cultures de Malassezia à l’aide du Kit Qiagen.

Les amorces spécifiques utilisées dérivent de la région ITS du gène de l’ARNr.

M.rt-F CTTGGTTGGACCGTCACTGG.

M.rt-R AGGCGGATGCAAAGTGTCTC.

M.sy-F CGGACGCAAACACGTCTCTG.

5.8S-R TTCGCTGCGTTCTTCATCGA.

Dans un volume final de 50μL, le Mix est composé de MgCl₂ 15mM+dNTP 100mM+25pM de chaque amorce et la Taq polymérase 2.5U. L’amplification est réalisée dans un thermocycler (My Cycler, Bio-Rad). La révélation des bandes spécifiques (190pb et 320 pb) est faite sur le gel d’agarose à 2 % au bromure d’éthidium.

Parmi les 15 souches de Malassezia, deux espèces ont été identifiées par PCR : Malassezia restricta et Malassezia sympodialis. Les résultats de l’identification moléculaire et phénotypique n’étaient pas concordants pour deux souches ce qui a été éclairci.

En raison des problèmes dans l’identification phénotypique des espèces de Malassezia, l’application de la PCR est intéressante, elle permet un diagnostic plus rapide. L’optimisation de la PCR et la caractérisation moléculaire de ces deux espèces de Malassezia est une première étape réalisée en Algérie, dont les perspectives visent à l’identification moléculaire des autres espèces.