This study presents a methodological approach for the visualization of the glycocalyx by electron microscopy. The glycocalyx is a three dimensional network mainly composed of glycolipids, glycoproteins and proteoglycans associated with the plasma membrane. Since less than a decade, the epithelial and endothelial glycocalyx proved to play an important role in physiology and pathology, increasing its research interest especially in vascular functions. Therefore, visualization of the glycocalyx requires reliable techniques and its preservation remains challenging due to its fragile and dynamic organization, which is highly sensitive to the different process steps for electron microscopy sampling. In this study, chemical fixation was performed by perfusion as a good alternative to conventional fixation. Additional lanthanum nitrate in the fixative enhances staining of the glycocalyx in transmission electron microscopy bright field and improves its visualization by detecting the elastic scattered electrons, thus providing a chemical contrast.

Cette étude présente un protocole expérimental pour la visualisation du glycocalyx en microscopie électronique. Le glycocalyx est un réseau tridimensionnel principalement composé de glycoprotéines, glycolipides et protéoglycanes associés à la membrane plasmique. Il suscite depuis moins d’une décennie d’un regain d’intérêt en raison de son rôle majeur dans la physiologie et pathologie vasculaire. Dès lors la visualisation du glycocalyx requiert des techniques adaptées car sa préservation reste difficile, dû à son organisation fragile qui reste particulièrement sensible aux différentes étapes de préparation pour la microscopie électronique. Dans cette étude, la fixation chimique par perfusion a été réalisée et reste une bonne alternative à la fixation conventionnelle par immersion. La supplémentation de la solution de fixation par le nitrate de lanthane permet de réhausser le contraste du glycocalyx en microscopie électronique transmission champ clair et d’utiliser la diffusion élastique des électrons pour son observation en contraste chimique (STEM-HAADF).