En 2017, au laboratoire de l’hôpital de Beauvais, un appareil de PCR en temps réel est installé. Ce travail décrit la vérification de méthode, en portée A de la trousse de PCR triplexe en temps réel, Urethritis basic^®, FTD, pour la détection qualitative de Chlamydia trachomatis (CT), Neisseria gonorrhoeae (NG) et Mycoplasma genitalium (MG). Pour répondre à la norme NF 15189, une analyse des risques ainsi que la vérification de certains critères de performance sont réalisées sur site. La fidélité intermédiaire pour NG est évaluée sur 2 échantillons donnant des résultats douteux au premier passage. Lors des passages suivants les résultats sont négatifs. La comparaison avec l’ancienne méthode en point final (GenoQuick^®CT, Hain Lifescience) pour la recherche de CT est réalisée sur 46 échantillons, 4 résultats sont discordants (tous positifs avec l’ancienne méthode et négatifs avec la nouvelle). L’exactitude est vérifiée par deux EEQ pour CT et NG : les résultats sont conformes. Les essais de contamination inter- échantillons montrent l’absence de contamination. Enfin, une vérification continue à l’aide de graphiques de Levey-Jennings construites à partir des « Cycles threshold » (Ct) des contrôles est mise en place. Ce travail a permis de conclure à l’aptitude de la méthode tout en confirmant l’intérêt de contrôler les échantillons trouvés douteux pour le gonocoque. Il propose également un outil de surveillance continue des performances.

Method verification, in range A, of a triplex real time PCR for the detection of Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae and Mycoplasma genitalium

In 2017, at the Beauvais hospital laboratory, a real time PCR system has been acquired. This work describes the method verification of a real time PCR kit, Urethritis basic^®, FTD, in range A, for the qualitative detection of Chlamydia trachomatis (CT), Neisseria gonorrhoeae (NG) and Mycoplasma genitalium (MG). According to the ISO 15189 standard, a risk analysis and a verification of some performance criteria are performed on site. Intermediate precision for NG is evaluated on two samples giving equivocal results. Following runs gives negative results. Comparison between the new and the previous end-point PCR method (GenoQuick^®CT, Hain Lifescience) for the detection of CT is performed on 46 samples. Four samples show discordant results (all positive with the previous method and negative with the new one). Accuracy is assessed by two EQA (External Quality Assessment) for CT and NG and gave expected results. Our tests of carry-over contamination, by alternating positive and negative samples, did not identify any contamination. Finally, we implemented continuous verification by Levey-Jennings charts established using threshold cycles of controls. This work let to conclude on the ability of the method while confirming the interest of controlling equivocal NG results. In addition, it provides a tool to continuously monitor the performance.