Application de la technique de FISH interphasique avec des sondes encadrantes dites de « split » à différents types de préparations histologiques et cytologiques - 30/03/08
F. Pelluard-Nehme [1],
T. Dupont [1],
M. Turmo [1],
J.-P. Merlio [1 et 2],
M.-A. Belaud-Rotureau [1 et 2]
Voir les affiliationsCes deux auteurs ont contribué de façon égale à ce travail. |
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Résumé |
L'hybridation in situ fluorescente (FISH) est une technique de cytogénétique moléculaire permettant la détection de translocations associées aux cancers. Nous avons évalué les performances de différents protocoles pour analyser par FISH des préparations histologiques avec des sondes encadrantes ou de « split ». Des empreintes de tissus frais (EF) ou congelé (EC), des coupes de tissus fixés par le formol (CF) et des noyaux isolés de tissus fixés par le formol (NI) ont été réalisées à partir de tissus lymphoïdes adultes et fœtaux non tumoraux. Les seuils de positivité des sondes de split IGH, IGλ, BCL-2, BCL-6, CCND1 et MYC ont été calculés en fonction de la préparation analysée (EC, CF, CC, NI) ainsi que pour les sondes IGH et BCL-6 en fonction du tissu étudié. Les résultats ont montré que les seuils de positivité variaient de 3 à 13 % selon la sonde utilisée. Pour un tissu donné, ces variations étaient indépendantes du type de préparation histologique. Inversement, pour une sonde donnée, des seuils voisins mais significativement différents étaient retrouvés selon les tissus. Cette étude a permis de proposer des procédures optimales pour l'analyse par FISH de tissus frais ou fixés par le formol avec des sondes encadrantes de split.
Abstract |
Fluorescent in situ hybridization (FISH) analysis is a molecular technique allowing the detection of recurrent translocations in cancer. Several hybridization protocols were assayed in order to evaluate their performances for interphase FISH analysis of histological sections and imprints using split probes. Adult and foetal lymphoid tissues were selected. Touch imprints of fresh (EF) or frozen (EC) tissues, sections (CF) and isolated nuclei (NI) of formol-fixed paraffin-embedded tissues were performed. The cut-off values of the IGH, IGλ, BCL-2, BCL-6, CCND1 and MYC DNA FISH split signal probes were calculated for adult reactive lymph nodes on the different histological preparations (EC, CF, CC, NI) and on several tissues for the IGH and BCL-6 probes. In reactive lymph nodes, the cut-off values of the probes were between 3 and 13% and found independent of the preparation type. Conversely, slight but significant variations of the cut-off level were observed when different foetal control tissues were assayed with the same probe set. Finally, this study provided optimized-protocols for FISH analysis of either fresh/frozen imprints or formalin-fixed paraffin-embedded sections using split signal DNA probes.
Mots clés : Hybridation in situ , FISH , Cytologie , Histologie , Sondes de split
Keywords:
In situ hybridization
,
FISH
,
Cytology
,
Histology
,
Split signal probes
Plan
Ces deux auteurs ont contribué de façon égale à ce travail. |
© 2007 Elsevier Masson SAS. Tous droits réservés.
Vol 91 - N° 292
P. 52-60 - mars 2007 Retour au numéro
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