Le carcinome canalaire in situ (CCIS) est une forme non invasive de cancer du sein, qui se définit comme une prolifération de cellules épithéliales néoplasiques situées dans la lumière des canaux mammaires sans envahir la membrane basale. Les CCIS représentent aujourd’hui 20 à 25 % de tous les cas de cancer du sein, grâce à leur détection par les programmes de dépistage du cancer du sein dans la population. Les CCIS sont entourés d’une couche continue de cellules myoépithéliales (CME) et recouverts d’une membrane basale intacte. Ces CCIS peuvent être considérés comme un stade précoce de la progression linéaire du cancer puisqu’ils peuvent éventuellement évoluer vers un carcinome canalaire invasif (CCI) après destruction de la membrane basale et la désorganisation des CME. En outre, de nombreuses études ont montré le rôle de l’obésité et du microenvironnement adipeux inflammatoire dans la progression du cancer, l’augmentation de la mortalité et la formation de métastases. Les acteurs du microenvironnement seraient capables de modifier les caractéristiques fonctionnelles des CME conduisant à un processus d’invasion. De plus, l’inflammation présente chez les individus obèses résulte d’un dialogue pro-inflammatoire entre les adipocytes et les macrophages. Ainsi, notre étude a consisté (1) à générer des tumoroïdes bicellulaires fluorescents reproduisant un CCIS afin de mimer la tridimensionnalité, les propriétés histologiques et physiologiques retrouvées dans les tumeurs solides du sein, et (2) à évaluer l’impact des acteurs du microenvironnement obésogène, les adipocytes et les macrophages sur ce modèle.

Un modèle 3D hétérotypique bi-fluorescent a été généré à l’aide de moules d’agarose afin d’évaluer l’impact du microenvironnement inflammatoire et adipeux sur les CME dans le contexte du CCIS. Le modèle est composé d’une tumoroïde de cellules cancéreuses canalaires in situ (lignée cellulaire MCF10-DCIS) entourée d’une couche continue de CME (lignée cellulaire Hs578Bst). Ces lignées ont été préalablement transduites avec des vecteurs lentiviraux pour obtenir des cellules marquées m-Cherry (vecteur LV-m-Cherry ; MOI 5) ou EGFP (vecteur LV-EGFP ; MOI 40) respectivement. Après optimisation du modèle 3D fluorescent mimant un CCIS, celui-ci a été cultivé en présence de différents surnageants obtenus à partir de la culture de cellules humaines : cellules souches adipeuses humaines (hASC) prélevées sur des femmes normopondérées (hASC20, IMC=20) ou obèses (hASC30, IMC=30), adipocytes matures (AM20, IMC=20 ; AM30, IMC=30), macrophages activés (M0) et macrophages pro-inflammatoires (M1). L’impact de ces surnageants sur le modèle mimant un CCIS a été évalué en mesurant la viabilité de chaque type cellulaire à l’aide du système IncuCyte®.

Après transduction lentivirale, les cellules MCF10-DCIS-m-Cherry et Hs578Bst-EGFP ont été triées à l’aide de l’analyseur/trieur de cellules BD FACSAriaTM SORP 5 lasers afin de sélectionner les cellules ayant une taille et des signaux fluorescents similaires. Ces cellules ont ensuite été utilisées pour générer des tumoroïdes bicellulaires fluorescents. Le système IncuCyte® a permis de suivre les étapes de la génération du modèle 3D et la mesure de l’intensité de fluorescence de chaque type cellulaire. Nos résultats montrent que les surnageants provenant de la culture des MAM30, des hASC20, des hASC30, des M0 et des M1 sont capables de diminuer significativement la viabilité des CME, alors que ceux provenant des hASC30, AM30, M0 et M1 augmentent significativement la viabilité des cellules cancéreuses. Le test Anova à une voie a été utilisé via le logiciel Prism.

Ces premiers résultats suggèrent que l’obésité et le microenvironnement inflammatoire seraient capables de favoriser l’invasion des CCIS en réduisant la viabilité des CME et en stimulant celles des cellules cancéreuses. Des études d’expression génique des 2 types cellulaires ainsi que le dosage des cytokines pro-anti-inflammatoires par Luminex sont en cours. De plus, notre modèle de tumoroïde permet de mimer le comportement des cellules dans le tissu tumoral et représente un outil prévenir l’évolution des CCIS vers les CCI.