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Optimisation d'une sélection in vitro d'enzymes - 01/01/03

Doi : 10.1016/S1631-0748(03)00067-5 

Emmanuelle  Orsi,  Jean-Luc  Jestin * *Corresponding author.

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Résumé

Une stratégie pour isoler un catalyseur pour une réaction chimique donnée consiste à extraire des enzymes à partir d'un ensemble de protéines distinctes par sélection en fonction de l'activité catalytique. L'étude de la réaction de polymérisation de l'ADN à la surface des phages filamenteux et du pontage du substrat aux phages est décrite pour optimiser une sélection in vitro en fonction de l'activité ADN polymérase. L'efficacité de la sélection, qui est la plus élevée décrite dans la littérature, est mesurée par un facteur d'enrichissement qui s'élève à 3,8 × 103. Elle est suffisante pour envisager l'évolution dirigée d'enzymes vers des activités catalytiques nouvelles. Pour citer cet article : E. Orsi, J.-L. Jestin, C. R. Chimie 6 (2003).

Mots clés  : évolution dirigée ; catalyse ; enzyme ; polymérase ; bactériophage filamenteux.

Abstract

Optimisation of an in vitro enzyme selection. Isolation of a catalyst for a given chemical reaction may be achieved by in vitro selection of enzymes from a protein library. Here, we investigate the polymerisation reaction on filamentous phage and the cross-linking of substrate on phage to optimise an in vitro selection for DNA polymerase activity. The efficiency of the optimised selection is measured by enrichment factors up to 3.8 × 103, the highest described so far for an in vitro selection of proteins for catalysis. It should be useful for directed polymerase evolution towards novel catalytic activities. To cite this article: E. Orsi, J.-L. Jestin, C. R. Chimie 6 (2003).

Mots clés  : directed evolution ; catalyst ; enzyme ; polymerase ; filamentous bacteriophage.

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Vol 6 - N° 4

P. 501-506 - avril 2003 Retour au numéro
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