Optimiser les paramètres de chromatographie et d’acquisition spectrale permettant un couplage innovant de chromatographie en fluide supercritique (SFC) avec un spectrométre de masse haute résolution (HRMS), et appliquer celui-ci à la recherche et au dosage de produits stupéfiants dans la salive.

Les dérivés amphétaminiques, cocaïniques et opiacés tels que définis dans l’arrêté du 13 décembre 2016 ayant trait à la conduite automobile ont été considérés. Le système analytique était constitué d’un système SFC couplé à un système HRMS de type QTOF (Nexera UC et LCMS-9050 ; Shimadzu, France). Dans un premier temps, un plan d’expérience a permis de déterminer le choix de la colonne chromatographique, les conditions d’élution en phase supercritique, et de tester différents modes d’acquisition spectrale ciblés ( single ion monitoring [SIM] ; multiple reaction monitoring [MRM/MS-MS]) et non ciblés ( data independant/dependant acquisition [DIA/DDA] ; Full-Scan MS). Puis, une validation de la méthode a été menée selon une procédure interne répondant aux exigences de la norme ISO 15189 en termes de linéarité, limite de détection et quantification, répétabilité, reproductibilité et exactitude. Enfin, la nouvelle méthode a été comparée à une méthode de LC-MS/MS en analysant 30 échantillons issus de l’activité de routine de toxicologie médico-légale du laboratoire.

La séparation chromatographique était réalisée dans une colonne Diol II (Shimpack, France) maintenue à 25 °C et à une pression de 150 bars, en utilisant du CO ₂  supercritique comme phase mobile principale, associé à un co-solvant méthanol contenant 2 mM de formiate d’ammonium (solvant B). Un flux make-up de méthanol à 0,080 mL/min était ajouté post-colonne afin d’optimiser l’ionisation. L’élution était effectuée selon un gradient de 2 % à 80 % de solvant B en 12 minutes, avec un débit de 1,0 mL/min, permettant une séparation efficace des composés d’intérêt. L’acquisition spectrale était réalisée, après ionisation en Electrospray positif, par un mode full-scan MS (approche non ciblé de 100 à 500 uma ; MS1) suivi d’un mode MSMS (approche ciblée avec les ions précurseurs des molécules d’intérêt et leurs étalons internes deutérés). La méthode a été entièrement validée pour une gamme dynamique de 5 à 500 ng/mL. La LOD était de 1 ng/mL pour l’ensemble des molécules. Dans l’échantillon de 30 salives prélevées chez des conducteurs automobiles, une parfaite concordance entre les résultats observés avec la méthode SFC-HRMS et la méthode de référence par LC-MS/MS a été observée, peu importe que le cas soit positif ou négatif.

Les conditions analytiques permettant de synchroniser un système de SFC et un HRMS ont été définis. Dans cette étude de faisabilité, ce couplage a permis d’atteindre des LOD faibles pour un panel de produits stupéfiants recherchés dans la salive. Ce couplage SFC-HRMS constitue une plateforme analytique originale, certainement polyvalente et respectueuse de l’environnement, s’inscrivant dans une démarche de réduction de l’empreinte environnementale liée aux solvants organiques.