L'immunophénotypage consiste à identifier les antigènes présents au niveau de la cellule. Les antigènes membranaires sont présents à la surface de la cellule ; d'autres déterminants peuvent être recherchés à l'intérieur de la cellule. Initialement produits par immunisation, les anticorps reconnaissant les antigènes cellulaires étaient identifiés au microscope à fluorescence sur coupes tissulaires ou cellules isolées, vivantes ou fixées.

L'apparition simultanée de la cytométrie en flux et de la production d'anticorps monoclonaux par les hybridomes a donné le jour à des procéedures de plus en plus spécifiques. Le grand nombre d'antigènes reconnus au niveau des cellules a rendu nécesaire un répertoire, une classification en CD, cluster de differenciation.

Les méthodes initiales ont consisté èxtraire du sant et des organes lymphoïdes les cellules immunocompétentes par gradient de densité sur le Ficoll. Les cellules étaient obtenues vivantes et stériles. Il est alors devenu possible de les cultiver et de les congeler Les marquages étaient alors effectués en méthode indirecte ou directe, avec des avantages de sensibilité du marquage et d'économie d'anticorps précieux. Mais ces méthodes prennent du temps et nécessitent des volumes de prélèvements importants.

Une nouvelle génération de méthodes s'est développée sur la base de la lyse des hématies. Tous les leucocytes du sang peuvent alors être analysés. Ces lyses, initialement “manuelles”, ont été “automatisées”.

La fixation des cellules marquées assure une conservation des échantillons et une élimination de tout risque de contamination virale.

Il est alors possible d'observer au cytomètre en flux avec un seul laser, de nombreux paramètres, des marquages multiples dans des condition sûres et reproductibles.

Immunolabelling is the fact to identify the cellular antigens. Membrane bound antigens are present at the cell surface, some others are intra-cytoplasmic. First, the immune antibodies were used to identify the cell antigens by fluorescence microscopy on living or isolated cells.

Flow cytometry and monoclonal antibodies producted by hybridomas appeared at the same period and special procedures were developped. The great number of antigens present on the cells were classified in CD, cluster of differentiation.

Initial methods to obtain cells were isolation by Ficoll density. The obtained cells were living and sterile and allowed to freeze and cultivate. The immuno-labelling was effected by direct and indirect methods, either sensitive or economic for precious reagents. But these methods are time consuming and large samplesare necessary.

A new generation of methods with erythrocyte lysis has been developed. The whole blood leucocytes methods, first “manual” are now “automatic”.

The fact to fix the labeled cells has two advantages : a best conservation of the samples and a good security against viral risk.

It is then possible by flow cytometry with single laser to proceed to a multiparameter analysis with multi-fluorescence in safe and reproductible conditions.