Vu l’importance clinique de la vitamine B9 et son rôle au niveau de nombreux désordres métaboliques, sa détermination et en particulier celle de l’une des formes prédominantes, le 5-méthyltetrahydrofolate s’avère nécessaire. La présente étude décrit une méthode par chromatographie liquide qui permet la détermination du 5-méthyltetrahydrofolate dans le sang total. Des prélèvements de sang total ont été soumis à une étape de déprotéinisation dans une solution d’acide ascorbique à +37 °C, puis soumis à une extraction par partition liquide-liquide. L’extrait est ensuite soumis à l’analyse par chromatographie en phase inverse suivie d’une détection fluorimétrique. Le 5-méthyltetrahydrofolate est élué en 9 minutes. Différents paramètres de conformité et essais de validation ont été appliqués pour apprécier la fiabilité de la méthode proposée. Les résultats des calculs des paramètres de conformité sont satisfaisants et indiquent que le système chromatographique est adapté pour l’analyse du 5-méthyltetrahydrofolate dans le sang total. Les résultats des essais de précision étaient inférieurs à 2 % pour la répétabilité de l’analyse chromatographie et inférieurs à 5 % pour les essais de fidélité intermédiaire. Le pourcentage moyen de récupération était de 92,50 %. Les limites de détection et de quantification étaient respectivement égales à 8 et 10 nmol/l. La méthode proposée permet une détermination du 5-méthyltetrahydrofolate dans le sang total avec une fiabilité satisfaisante.

Given the clinical importance of vitamin B9 and its role in many disorders, its determination and particularly of one of its predominant circulating form: 5-methyltetrahydrofolate is a necessity. The present study describes a liquid chromatography method that allows determination of 5-methyltetrahydrofolate in whole blood. Defrosted whole blood samples were deproteinized in an ascorbic acid solution at + 37 °C, then submitted to a liquid-liquid partition extraction. The extract is then analyzed by reversed phase liquid chromatography followed by fluorimetric detection within 9 minutes. Different system suitability parameters and validation procedure tests were applied to evaluate the reliability o the proposed method. System suitability parameters were satisfactory for the intended application. Precision results for 5-methyltetrahydrofolate were better than 2 % for chromatographic analysis and better than 5 % for the entire procedure and interassay. Average recovery results was 92.50 %. Limits of detection and quantification were respectively 8 and 10 nmol/l. The proposed liquid chromatography method determines 5-methyltetrahydrofolate in whole blood with a satisfactory reliability.