Quantification de l’apoptose in vivo : comparaison de méthodes de détection sur coupes histologiques de tumeurs xénogreffées issus de la lignée cellulaire humaine d’adénocarcinome colique HT-29 - 09/12/09
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Résumé |
La détection de cellules apoptotiques sur coupes histologiques présente un intérêt scientifique majeur, mais reste cependant mal maîtrisée par les méthodes classiques (étude des modifications morphologiques cellulaires et technique Tunel). L’immunomarquage de protéines activées durant le processus de mort cellulaire permet la détection d’un plus grand nombre de cellules en apoptose.
Objectif |
Cette étude se propose de comparer plusieurs marqueurs de l’apotose (méthodes dites classiques, détection immunohistochimique des caspases-3 et -7 activées, cytokératine-18 clivée et Parp-1 clivée) afin de déterminer celle permettant la détection d’un plus grand nombre de cellules en apoptose.
Matériel et méthodes |
Les différents marqueurs ont été étudiés sur des tumeurs xénogreffées chez la souris nude ; issues de la lignée cellulaire humaine d’adénocarcinome colique HT-29, ayant subi un traitement par photothérapie dynamique afin d’induire l’apoptose. Cette évaluation s’effectue par comparaison des indices apoptotiques obtenus pour chaque technique.
Résultats |
Les indices apoptotiques obtenus par immunomarquage des protéines cytokératine-18 clivée et caspase-3 activée sont statistiquement plus élevés par rapport aux autres techniques.
Conclusion |
Les anticorps anti-caspase-3 activée et cytokératine-18 clivée s’imposent comme d’excellents marqueurs de l’apoptose sur coupe histologique, les autres marqueurs pouvant être des alternatives intéressantes.
Le texte complet de cet article est disponible en PDF.Summary |
Apoptosis detection in histological section is very important, but usual methods (TUNEL and morphologic changes) are controversial. Immunohistochemical stains of activated proteins during apoptosis improve detection of cell death in tissue sections. Activated caspase-3 and cleaved cytokeratin-18 are more and more used.
Objective |
This study compared immunohistochemical markers (activated caspase-3, cleaved cytokeratin-18 and two antibodies not yet evaluated: activated caspase-7 and cleaved PARP-1), cellular morphology and TUNEL.
Material and methods |
Tumour xenografts of the human colon cancer cell line HT29 were used, treated by photodynamic therapy, to obtain large numbers of cells undergoing apoptosis. Apoptotic cells were quantified and apoptotic indices were determined for each marker.
Results |
Comparaison of apoptosis index indicated statistically best sensibility with activated-caspase-3 and cleaved-cytokeratin-19.
Conclusion |
Immunohistochemistry for activated caspase-3 and cleaved cytkeratin-18 appear to be an easy, sensitive, and reliable method for detecting and quantifying apoptosis in this model. There are therefore recommended for the detection and quantification of apoptosis in tissue sections. Other markers as cleaved PARP-1 and activated caspase-7 can be an interessant solution: advantages and inconvenients for each methods are exposed.
Le texte complet de cet article est disponible en PDF.Mots clés : Apoptose, Immunohistochime, Caspase-3 activée, Parp-1 clivée, Caspase-7 activée, Cytokératine-18 clivée
Keywords : Apoptosis, Immunohistochemistry, Actived caspase-3, Cleaved PARP-1, Activated caspase-7, Cleaved cytokeratin-18
Plan
Vol 29 - N° 5
P. 370-375 - octobre 2009 Retour au numéro
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- Détection et quantification de l’apoptose dans les tissus : un défi
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