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Comparaison de la trousse LightCycler® CMV Quant Kit (Roche Diagnostics) avec une PCR « maison » standardisée pour la quantification du CMV sur sang total - 20/04/10

Doi : 10.1016/j.patbio.2009.08.003 
S. Alain a, b, c, , V. Lachaise a, S. Hantz a, b, c , F. Denis b, c
a Centre national de référence des cytomégalovirus, CHU de Limoges, 2, avenue M.-L.-King, 87000 Limoges, France 
b Laboratoire de bactériologie–virologie, CHU de Limoges, 2, avenue M.-L.-King, 87000 Limoges, France 
c EA3175 Inserm, faculté de médecine de Limoges, université de Limoges, Limoges, France 

Auteur correspondant. CNR des cytomégalovirus, laboratoire de bactériologie–virologie, CHU de Limoges, 2, avenue M.-L.-King, 87000 Limoges, France.

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Résumé

L’intérêt de la quantification de la charge virale sanguine pour la surveillance de l’infection à cytomégalovirus (CMV) chez les immunodéprimés justifie le développement de trousses standardisées. Le sang total (ST) est un prélèvement de choix du fait de la simplicité du traitement préanalytique et du stockage. Nous avons comparé les performances sur ST de la trousse LightCycler® CMV Quant Kit (Roche Diagnostics) couplée à une extraction manuelle (High Pure viral nucleic acid kit, Roche Diagnostics) avec une méthode Taqman artisanale validée en pratique clinique (PCR LC1UL83).

Méthodes

Un contrôle de qualité plasmatique pur ou dilué en ST, une gamme de surnageant de culture de CMV diluée en ST et 46 échantillons de ST de patients transplantés ont été testés simultanément dans les deux techniques.

Résultats

Les résultats de CMV Quant Kit sont proches des valeurs attendues pour les contrôles de qualité. Les deux méthodes sont bien corrélées sur plasma (R2=0,93). Sur ST, la corrélation devient satisfaisante au-dessus de 3 log (R2=0,94), avec une sur-quantification de 1,2 log avec la PCR LC1UL83. Sur échantillons cliniques, une différence de quantification de 0,76 log copies/ml est observée, mais les deux méthodes sont corrélées (r=0,82 ; p<0,00001).

Conclusion

La trousse CMV Quant Kit avec extraction manuelle peut être recommandée sur ST. Nos résultats soulignent la nécessité de suivre un patient avec la même technique tout au long de son histoire clinique et l’utilité d’un contrôle de qualité pour le ST.

Le texte complet de cet article est disponible en PDF.

Abstract

The broad use of cytomegalovirus (CMV) viral load quantification in blood to follow immunosuppressed patients need standardized assays. Choice of whole blood allows follow-up for several viruses and simplifies pretreatment and storage of samples.

Methods

We therefore evaluated the LightCycler® CMV Quant Kit (Roche Diagnostics) assay on whole blood after a manual extraction (High Pure viral nucleic acid kit, Roche Diagnostics), using as a reference an in-house Taqman assay (LC1UL83) which has been validated in various clinical situations. A panel obtained by serial dilutions of a virion stock in CMV whole blood, a commercial plasma quality control (VQC, Argène, France) crude or diluted in whole blood, infected cells extracts and 46 clinical samples from transplanted patients were tested simultaneously by both techniques.

Results

For plasma quality controls, both PCR assays are correlated VQC (R2=0.93). On whole blood or infected cells dilutions, correlation shows an overestimation by the LC1UL83 assay (mean 1.2 log copies/ml) over 3 log though R2=0.94. Results with CMV Quant Kit are closer to expected values. Results on clinical samples are close to quality controls with a lower variation of quantification (0.76 log copies/ml).

Conclusion

CMV Quant Kit performs well when compared with a clinically validated PCR. Quality control results showed discrepancies between plasma and whole blood, demonstrating the need for whole blood standardized panels to compare the methods. This underlines the need to follow a patient with the same technique during his follow-up.

Le texte complet de cet article est disponible en PDF.

Mots clés : Cytomégalovirus, Quantification, PCR en temps réel, Sang total, Antigénémie

Keywords : Cytomegalovirus, Real-time PCR, Viral load, Whole blood, Antigenaemia


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Vol 58 - N° 2

P. 156-161 - avril 2010 Retour au numéro
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