La vitamine D est une molécule liposoluble qui joue un rôle essentiel dans la régulation du métabolisme osseux. C’est habituellement la 25-hydroxy-vitamine D3 plasmatique qui est dosée pour déterminer le statut vitaminique car en plus de sa stabilité et de sa longue demi-vie, elle représente la forme circulante majoritaire. L’objectif de ce travail est de mettre au point et de valider une méthode de dosage de la 25-hydroxy-vitamine D3 par CLHP qui soit simple, sensible et rapide pouvant être appliquée en routine.

La première étape nécessaire pour le dosage plasmatique est une déprotéinisation. L’élution de la molécule est réalisée sur des colonnes d’extraction. L’éluant est évaporé puis reconstitué dans de la phase mobile lors de l’injection dans le circuit de la CLHP. Nous avons sélectionné les meilleures conditions chromatographiques pour le dosage de la 25-hydroxy-vitamine D3 plasmatique et procédé à la validation de la méthode. Le CV de reproductibilité était de 1,08 % ; celui de répétabilité était de 1,84 %. La linéarité, rapportée par le coefficient de corrélation de la courbe de régression, était de 0,996 pour des concentrations allant de 10 à 150 ng/ml. La limite de quantification était de 0,34 ng/ml et la limite de détection de 0,11 ng/ml.

Vitamin D is a liposoluble molecule playing an essential role in the regulation of bone metabolism. Vitamin D status is usually assessed by measuring the plasma 25-hydroxy-vitamin D3 concentration. 25-hydroxy-vitamin D3 is stable, has a long half-life and is the main circulating form of vitamin D. Our aims were to determine and validate a simple, sensitive and rapid method for plasma 25-hydroxy-vitamin D3 monitoring by HPLC which could be applicable in routine.

In 25-hydroxy-vitamin D3 plasma monitoring, the first step was a deproteinization. The elution was made on extraction columns. The eluent was evaporated, suspended in the mobile phase and injected into the HPLC system. Results were quantified by the calibration curve and calculated by integrating the peak areas. We selected the best chromatographic conditions and proceeded to our technique validation.

The calibration curve was constructed for aqueous standards with concentrations varying from 10 to 150 ng.ml⁻¹. The correlation coefficient was 0.996. The limit of quantification was 0.34 ng.ml^-1 and the limit of detection was 0.11 ng.ml-1. The coefficient of variation (CV) was equal to 1.84% showing that the method provides a good repeatability. The reproducibility expressed by the CV did not exceed 1.08% in all concentrations.

In conclusion, we presented a rapid, reliable and low cost method for plasma 25-hydroxy-vitamin D3 monitoring.