Au cours de la néphropathie à IgA (NIgA), le C3 est fréquemment colocalisé avec les depôts mésangiaux d’IgA et la délétion de CFHR1/3 a récemment été identifiée comme protectrice, soulignant le rôle de la voie alterne au cours de la maladie. Nous avons recherché la présence de formes activées de C3 au sein des complexes immuns (CI) artificiels, modèles in vitro de NIgA.

Les CI étaient formés par incubation de IgA1-dg (IgA1 polymérique purifiée issue de myélome, pAle), d’une IgG recombinante anti-glycane (r1123) et de sérum normal déplété en IgA et IgG. Les fractions obtenues par chromatographie sur gel stimulant la prolifération des cellules mésangiales en culture étaient mélangées et traitées par électrophorèse sur gel. Après marquage à l’argent, les bandes étaient découpées pour analyse par spectrométrie de masse haute résolution (LTQ Orbitrap Velos ; MS/MS, algorithmes MASCOT et SEQUEST).

L’analyse protéomique révélait la présence d’éléments des chaînes α et β du C3 au sein des complexes immuns stimulant les cellules mésangiales, alors qu’une faible quantité de chaîne β était détectable avec le contrôle négatif (sérum seul). La combinaison des séquences d’acides aminés détectées par spectrométrie et la masse moléculaire déduite des bandes de gel permettaient de révéler la présence de iC3b, C3c et C3dg (confirmé par immunoblot anti-C3).

La présence de ces produits de faible masse moléculaire au sein de fractions de très hautes masses n’est possible que par liaison non covalente aux complexes immuns. Ces résultats montrent que les complexes immuns IgA1-dg/IgG anti-glycane capables de stimuler les cellules mésangiales activent le C3, en faveur d’une mise en jeu de la voie alterne.