Le screening toxicologique par spectrométrie de masse à temps de vol permet une analyse approfondie des résultats, même a posteriori. En complément, la production de métabolites non encore répertoriés de médicaments et/ou de produits stupéfiants à l’aide de microsomes hépatiques humains constitue un outil de choix pour enrichir les librairies et améliorer en continu les performances diagnostiques de ce screening. Nous proposons ici un exemple de cette stratégie dans le domaine des nouveaux produits de synthèse (NPS).

Un homme de 34ans, expérimentateur de NPS, est retrouvé inconscient sur la voie publique. À son arrivée en réanimation, il présente un score de Glasgow à 6, un syndrome extra-pyramidal et un myosis. Des prélèvements sanguin et urinaire sont effectués à l’admission pour la réalisation d’analyses toxicologiques.

Un screening toxicologique large pour la recherche de médicaments et de stupéfiants par UPLC-G2 QTOF (Waters) est mis en œuvre. En pratique, 100μL de solution d’étalons internes et 400μL de solution d’acide sulfosalicylique à 3 % sont ajoutés à 100μL d’échantillon sanguin ou urinaire. Le surnageant est analysé par un UPLC-G2 QTOF. L’extraction du surnageant s’effectue en ligne à l’aide d’une cartouche OASIS HLB (Waters). La séparation chromatographique est réalisée dans une colonne Acquity UPLC HSS C₁₈ (Waters) à l’aide d’un gradient d’élution tampon formate d’ammonium à pH 3 – acétonitrile/0,1 % d’acide formique. Après ionisation en mode électrospray positif, l’acquisition se fait en mode MSe. Les métabolites des xénobiotiques identifiés sont recherchés in silico à l’aide des logiciels MassFragment™ et UNIFI™, en renseignant les différentes voies métaboliques plausibles. Parallèlement, pour la caractérisation in vitro de leurs métabolites, les NPS identifiés sont incubés à 37°C pendant 120min avec un pool de microsomes hépatiques humains et les co-substrats nécessaires au fonctionnement des principales enzymes de phases 1 (P450) et 2 (UGT). Ces incubats sont ensuite analysés à l’aide de la méthode précédemment décrite.

Les screenings sanguin et urinaire ont mis en évidence la présence de buprénorphine (4,6μg/L), de clobazam (2460μg/L), de paroxétine (39μg/L) et de leurs métabolites, ainsi que deux NPS, la diphénidine et le 5-MeO-DALT (5-méthoxy-N,N-diallyltryptamine), à des concentrations sanguines respectives de 220 et 360μg/L. La prédiction in silico de leur métabolisme a permis de caractériser : (i) pour la diphénidine, des métabolites hydroxylés et glucuronoconjugués, et (ii) pour le 5-MeO-DALT, des métabolites désalkylés, hydroxylés et glucuronoconjugués. La comparaison avec les résultats obtenus à partir des préparations microsomales a permis de confirmer l’ensemble des métabolites identifiés in silico et de caractériser quelques autres métabolites mineurs.

Ce cas d’intoxication par la diphénidine et le 5-MeO-DALT, dont l’issue a été favorable, n’a jamais été rapporté dans la littérature. Il constitue une preuve (i) de la réalité de la consommation de NPS en France, et (ii) de l’efficience de la stratégie utilisée, combinant des approches in vitro, in silico et in vivo, pour l’amélioration de l’identification des médicaments et des drogues via leurs métabolites et, en conséquence, des performances du screening toxicologique par QTOF.