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Recherche et/ou dosage simultané en 10 minutes des cannabinoïdes, des opiacés/opioïdes, des dérivés amphétaminiques et de la cocaïne et ses métabolites, dans le sang total par UPLC-MS/MS - 07/05/15

Doi : 10.1016/j.toxac.2015.03.046 
J.-F. Wiart , V. Clin, C. Richeval, L. Humbert, A. Garat, J.-M. Gaulier, D. Allorge
 Laboratoire de toxicologie, centre de biologie–pathologie, CHRU, Lille, France 

Auteur correspondant.

Riassunto

Objectifs

À l’instar d’autres laboratoires, le laboratoire de toxicologie du CHRU de Lille réalise depuis 2007 la recherche et/ou le dosage des quatre familles de stupéfiants par UPLC-MS/MS en utilisant deux méthodes distinctes, à savoir deux types d’extraction (LLE et SPE), deux colonnes chromatographiques et deux phases mobiles différentes. L’objectif de cette présentation est de proposer une méthode « unifiée » permettant l’analyse simultanée des quatre familles de stupéfiants à l’aide d’une plateforme XEVO TQ-S (Waters®).

Méthodes

Après une simple défécation de 100μL de sang total par 300μL de méthanol contenant 19 homologues deutérés*, 100μL de surnageant sont mélangés à 100μL de tampon formate d’ammonium 0,5mM+0,1 % d’acide formique (pH 3). Dix microlitres de ce mélange sont ensuite injectés dans une colonne Acquity UPLC® BEH C18 (2,1×100mm ; 1,7μm). La séparation chromatographique est réalisée à l’aide d’un gradient de phase mobile composé d’acétonitrile+0,1 % d’acide formique et de tampon formate d’ammonium 0,5mM+0,1 % d’acide formique (pH 3). Le débit utilisé est de 0,5mL/min et la durée d’un cycle est de 10min. La détection est réalisée en mode d’ionisation positive et deux transitions MRM sont utilisées par analyte.

Résultats

Cette méthode permet d’obtenir une LDQ de 0,5ng/mL pour tous les analytes (Morphine*, Codéine*, 6-MAM*, Pholcodine, Dihydrocodéine*, THC*, THC-OH*, THC-COOH*, Cocaïne*, Benzoylecgonine*, Ecgonine méthyl ester*, Cocaéthylène*, Ephédrine, Methamphétamine*, MDA*, MDMA*, MDEA*, Méphédrone*, Méthadone* et EDDP*), excepté pour l’amphétamine* pour laquelle la LDQ est de 1ng/mL. La linéarité a été vérifiée jusque 150ng/mL pour l’ensemble des analytes. Les tests de répétabilité et de fidélité intermédiaire présentent des valeurs de CV respectivement inférieures à 10 % et 20 %.

Conclusion

Cette méthode de dosage simultané des cannabinoïdes, des opiacés/opioïdes, des dérivés amphétaminiques et de la cocaïne et ses métabolites, dans le sang total par UPLC-MS/MS a été évaluée favorablement par le COFRAC selon la norme 17025 en portée flexible. Au-delà de sa simplicité de mise en œuvre et de son efficience, elle permet l’utilisation d’un volume réduit d’échantillon (100μL), mais également de solvants organiques. Par ailleurs, cette méthode semble particulièrement adaptée pour l’analyse de spots de sang séché et de la salive.

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