Démontrer la faisabilité de l’analyse du phosphatidyléthanol (PEth) à partir d’un micro-échantillon de sang capillaire collecté sur papier filtre (dried blood spots [DBS]).

Le PEth est un métabolite de l’éthanol issu d’une voie non-oxydative mineure. Par rapport à des marqueurs indirects comme la CDT et la ɣ-GT, le PEth est un marqueur sanguin direct de la consommation d’alcool offrant de meilleures performances en termes de sensibilité et de spécificité [1Hartmann S., et al. Phosphatidylethanol as a sensitive and specific biomarker: comparison with gamma-glutamyl transpeptidase, mean corpuscular volume and carbohydrate-deficient transferrin Addict Biol 2007 ;  12 : 81-84 [cross-ref]

Cliquez ici pour aller à la section Références]. En raison de sa longue demi-vie (4 jours), il est possible de tracer la consommation d’un individu jusqu’à 3 semaines avant le prélèvement. Le PEth n’est toutefois pas stable une fois collecté si le tube de sang n’est pas conservé au congélateur [2Faller A., et al. Stability of phosphatidylethanol species in spiked and authentic whole blood and matching dried blood spots Int J Legal Med 2013 ;  127 : 603-610 [cross-ref]

Cliquez ici pour aller à la section Références], ainsi l’optimisation du pré-analytique s’est révélé être un facteur déterminant pour le rendu de résultats fiables. L’utilisation de papier filtre associé à un micro-prélèvement de sang capillaire a été évaluée pour la quantification du PEth.

Les échantillons sanguins sont prélevés à l’aide du dispositif microfluidique HemaXis™ (DBS System) afin de standardiser le volume de sang déposé sur le papier filtre (10,5μL). Pour l’analyse, les échantillons DBS sont extraits selon la procédure in vial [3Déglon J., et al. Rapid LC–MS/MS quantification of the major benzodiazepines and their metabolites on dried blood spots using a simple and cost-effective sample pretreatment Bioanalysis 2012 ;  4 : 1337-1350

Cliquez ici pour aller à la section Références] et analysés par une méthode LC-MS/MS validée au laboratoire. La répétabilité du dispositif de prélèvement HemaXis™ a été évaluée sur la base d’échantillons de sang blanc fortifiés avec le PEth à deux niveaux de concentration (40 et 300ng/mL). En parallèle, la stabilité du PEth a été investiguée en comparant trois conditions de stockage (sang liquide conservé à −20°C, lyophilisats conservés à 4°C et DBS conservés à température ambiante) sur une période de 6 mois.

Les concentrations moyennes de PEth mesurées pour les deux niveaux de concentration et pour chaque temps (t₁=14j, t₂=47j, t₃=88 j, t₄=196j) donnent des biais compris entre −13,2 et 5,6 % pour le sang liquide stocké à −20°C ; −20,8 et 2,9 % pour les lyophilisats à 4°C et −9,4 et 9,1 % pour les DBS à température ambiante. Les répétabilités observées pour les trois conditions, respectivement 2,8 % pour le sang liquide (n=5) ; 2,8 % pour le lyophilisat (n=5) et 3,4 % pour HemaXis™ (n=10) sont statistiquement similaires.

L’utilisation du dispositif HemaXis™ permet de contrôler le volume de sang collecté au bout du doigt avec le même niveau de précision qu’une micropipette de laboratoire. De plus, le format DBS sur papier filtre permet de stabiliser le PEth sur une période d’au moins 6 mois sans avoir besoin de recourir à une chaîne du froid. Considérant ces résultats, l’analyse du PEth a été introduite en routine au sein du laboratoire en collaboration avec différents médecins addictologues de Suisse Romande. L’optimisation du pré-analytique permet ainsi d’effectuer les prélèvements DBS directement au cabinet des cliniciens avant qu’ils ne soient envoyés par poste dans une simple enveloppe au laboratoire.