Développement et validation d’une méthode analytique pour la quantification d’un panel de 35 benzodiazépines en matrice plasma et sérum par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem (LC-MS/MS).

Une méthode analytique a été développé puis validée pour un panel de 35 benzodiazépines dans du plasma humain ou du sérum. Les molécules analysées sont les suivantes : 3-hydroxybromazépam, 7-aminoclonazépam, 7-aminoflunitrazépam, 7-aminonitrazépam, α-OH-alprazolam, α-OH-midazolam, α-OH-triazolam, alprazolam, bromazépam, chlordiazépoxide, clobazam, clonazépam, demoxépam, desalkylflurazépam, desméthylflunitrazépam, diazépam, estazolam, flunitrazépam, flurazépam, lorazépam, lormetazépam, medazépam, midazolam, nitrazépam, norclobazam, nordiazépam, oxazépam, prazépam, témazépam, tétrazépam, trazodone, triazolam, zaléplon, zolpidem, et zopiclone. Une vingtaine d’étalons internes a été utilisée pour la quantification de ces composés. Les échantillons ont été préparés par simple précipitation des protéines après ajout du mélange d’étalons internes à l’échantillon. Les échantillons extraits ont ensuite été injectés sur un système Thermo Scientific™ Vanquish™ Flex binaire couplé à un triple quadripôle Thermo Scientific™ TSQ Quantis™. Les performances de la méthode ont été évaluées à l’aide du kit ClinMass^® TDM dédiée à l’analyse des benzodiazepines (RECIPE Chemicals+Instruments GmbH ; Munich, Allemagne). Le logiciel Thermo Scientific™ TraceFinder™ 4.1 a été utilisé pour l’acquisition et le traitement des données.

Les performances de la méthode ont été évaluées au regard des critères de validation suivants : linéarité, justesse et précision intra- et inter-jour. Une bonne linéarité a été obtenue sur la gamme de concentrations couverte par l’ensemble des calibrateurs fournis dans le kit. La justesse de la méthode a été évaluée en comparant les concentrations déterminées expérimentalement à celles fournies pour les contrôles de qualité RECIPE (MS6082 lot 1267). Les biais observés varient de −9,3 à 10,3 % pour l’ensemble des composés. Pour l’étude de la répétabilité, des coefficients de variation inférieurs à 14,8 % et 11,3 % ont été respectivement obtenus pour les essais intra-jour et inter-jour pour l’ensemble des molécules considérées. Les limites de quantification correspondent au point de calibration le plus bas fourni dans le kit ClinMass^® TDM et vont de 1,84ng/mL (pour le lormétazépam) à 251ng/mL (pour le norclobazam).

Une méthode LC-MS/MS a été implémentée pour la quantification de 35 benzodiazépines dans le plasma et le sérum. La méthode a été développée à l’aide du kit ClinMass^® TDM dédiée à l’analyse des benzodiazépines. Cette approche est basée sur une préparation simple, rapide et une méthode facile à mettre en œuvre. Elle présente une sensibilité, une linéarité, une justesse et une précision qui sont adaptées pour l’analyse de ce type de composés par LC-MS/MS.