Dans notre établissement, le protocole thérapeutique de prise en charge des encéphalopathies épileptiques néonatales a évolué, recommandant l’administration en première intention de pyridoxal phosphate (P5P) associé à la pyridoxine, remplaçant la pyridoxine seule relayée par P5P. Une préparation hospitalière (PH) de gélules de P5P a été développée par l’Hôpital Robert Debré pour répondre à ce nouveau besoin. Mettre en place cette PH nécessite des contrôles libératoires avant dispensation.

Développer et valider des méthodes rapides et fiables par spectrophotométrie UV-Visible pour les contrôles à réaliser sur les gélules de P5P permettant la réalisation des essais Pharmacopée européenne 2.9.3 et 2.9.40.

La méthode de dosage a été développée à l’aide d’un spectrophotomètre UV-Visible (Emc ² , SAFAS). La longueur d’onde optimale a été déterminée par analyse des spectres UV du P5P seul et en présence d’excipients pour vérifier l’absence d’effet matrice. Le choix du milieu de dissolution a été effectué en comparant les résultats obtenus avec de l’eau osmosée, un tampon acétate (pH 4,5) et un tampon phosphate (pH 6,8). La validation de la méthode a été réalisée selon les ICH Q2(R1) sur 3 jours par 3 opérateurs différents. Une gamme étalon (30 à 70 μg/mL) a permis d’évaluer la linéarité. La précision a été validée sur le centre de gamme (50 μg/mL) préparé indépendamment 6 fois et la justesse sur 3 concentrations (30, 40 et 70 μg/mL) mesurées 3 fois. Les limites de détection (LOD) et de quantification (LOQ) ont été calculées. Après production d’un lot pilote, l’essai 2.9.40 a été réalisé sur 10 gélules dosées à 10 mg et l’essai de dissolution sur 6 gélules dans 250 mL de milieu à l’aide de l’appareil de dissolution (PT-DT70, Pharmatest).

La longueur d’onde optimale a été fixée à 388 nm. Le tampon phosphate à pH 6,8 s’est révélé être le milieu de dissolution le plus adapté. La méthode s’est avérée linéaire sur le domaine 30–70 μg/mL ( R ² = 0,999), précise (CV < 3,3 %) et juste (CV < 4,9 %). Les LOD et LOQ ont été respectivement déterminées à 3,91 μg/mL et 17,34 μg/mL. Au total, le lot pilote s’est révélé conforme aux critères des essais 2.9.40 (VA < 15) et 2.9.3 (Q > 85 % après 10 min).

La mise au point de la méthode a nécessité de s’affranchir des effets hyperchromes induits par le bicarbonate de sodium, responsable de la déprotonation du P5P en solution aqueuse. L’utilisation d’un tampon phosphate a permis d’éviter ce phénomène et de stabiliser les mesures. Cette méthode garantit des contrôles qualité fiables rapides et reproductibles des gélules de P5P et permet la réalisation des essais de dissolution et des contrôles d’uniformité des préparations unidoses. Ainsi, ces gélules pourront être préparées à l’avance afin de répondre immédiatement aux demandes urgentes de la situation clinique liée à cette PH.