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Reference genes for quantitative PCR in the adipose tissue of mice with metabolic disease - 13/03/17

Doi : 10.1016/j.biopha.2017.01.091 
Fernanda Almeida-Oliveira a, b, João G.B. Leandro b, Priscila Ausina b, Mauro Sola-Penna b, David Majerowicz c,
a Instituto de Bioquímica Médica Leopoldo de Meis, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, Brazil 
b Laboratório de Enzimologia e Controle do Metabolismo (LabECoM), Departamento de Biotecnologia Farmacêutica, Faculdade de Farmácia, Rio de Janeiro, Brazil 
c Laboratório de Alvos Moleculares, Departamento de Biotecnologia Farmacêutica, Faculdade de Farmácia, Rio de Janeiro, Brazil 

Corresponding author at: Avenida Carlos Chagas Filho, 373, CCS, Bloco B - 1° andar - Sala 35, Cidade Universitária, Rio de Janeiro, CEP: 21941−902, Brazil. Avenida Carlos Chagas Filho, 373, CCS, Bloco B - 1° andar - Sala 35, Cidade Universitária, Rio de Janeiro, CEP: 21941−902, Brazil.

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Abstract

Obesity and diabetes are metabolic diseases and they are increasing in prevalence. The dynamics of gene expression associated with these diseases is fundamental to identifying genes involved in related biological processes. qPCR is a sensitive technique for mRNA quantification and the most commonly used method in gene-expression studies. However, the reliability of these results is directly influenced by data normalization. As reference genes are the major normalization method used, this work aims to identify reference genes for qPCR in adipose tissues of mice with type-I diabetes or obesity. We selected 12 genes that are commonly used as reference genes. The expression of these genes in the adipose tissues of mice was analyzed in the context of three different experimental protocols: 1) untreated animals; 2) high-fat-diet animals; and 3) streptozotocin-treated animals. Gene-expression stability was analyzed using four different algorithms. Our data indicate that TATA-binding protein is stably expressed across adipose tissues in control animals. This gene was also a useful reference when the brown adipose tissues of control and obese mice were analyzed. The mitochondrial ATP synthase F1 complex gene exhibits stable expression in subcutaneous and perigonadal adipose tissue from control and obese mice. Moreover, this gene is the best reference for qPCR normalization in adipose tissue from streptozotocin-treated animals. These results show that there is no perfect stable gene suited for use under all experimental conditions. In conclusion, the selection of appropriate genes is a prerequisite to ensure qPCR reliability and must be performed separately for different experimental protocols.

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Keywords : qPCR, Reference genes, Adipose tissue, Mice, Obesity, Diabetes


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Vol 88

P. 948-955 - aprile 2017 Ritorno al numero
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  • Vaccinium virgatum fruit extract as an important adjuvant in biochemical and behavioral alterations observed in animal model of metabolic syndrome
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