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Optimised immunofluorescence method on cleared intact Mongolian gerbil cochlea - 28/03/20

Doi : 10.1016/j.anorl.2020.01.015 
M. Risoud , a, b , M. Tardivel c, P.-E. Lemesre a, b, N.-X. Bonne a, d, C. Vincent a, b
a CHU de Lille, Department of Otology and Neurotology, 59000, Lille, France 
b Université de Lille, CHU de Lille, INSERM U1008 - Controlled Drug Delivery Systems and Biomaterials, 59000 Lille, France 
c Université de Lille, BioImaging Centre Lille-Nord de France (BICeL), 59000, Lille, France 
d Université de Lille, CHU de Lille, INSERM U1192 - Proteomics Inflammatory Response Mass Spectrometry (PRISM), 59000 Lille, France 

Corresponding author at: CHU de Lille, Otologie et otoneurologie, hôpital Roger-Salengro, 2, rue Emile-Laine, 59037 Lille cedex, France.CHU de Lille, Otologie et otoneurologie, hôpital Roger-Salengro2, rue Emile-LaineLille cedex59037France

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Abstract

Immunofluorescence on cleared intact cochlea allows detailed analysis of the cochlear ultrastructure, while avoiding the problems of dissection and serial sections. Protocols have been developed for mice and Mongolian gerbils. This technical note proposes a detailed and optimised immunofluorescence protocol in the Mongolian gerbil comprising significant quantitative and qualitative improvements. This protocol sequentially comprises: fixation (1 day), decalcification (6 days), pre-treatment (7.5hours), immunolabelling (42hours), dehydration and clearing (23hours), followed by mounting and laser scanning confocal microscopy acquisition. This protocol has been optimised in terms of duration (10 days versus 13 days) with a reduction of the number of steps, improvement of the specificity of immunolabelling and optimisation of the quality of the results obtained. This technical note provides a detailed description of this protocol.

Il testo completo di questo articolo è disponibile in PDF.

Keywords : Immunofluorescence, Transparency, Clarifying, Cochlea, Hair cells, Mongolian gerbil, Laser scanning confocal microscopy


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Vol 137 - N° 2

P. 145-150 - marzo 2020 Ritorno al numero
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