The goal of this study was to develop sample preparation method and validate the HPLC method for precise determination of paclitaxel (Ptx) in PLGA submicron particles conjugated with protein vector molecule.

Ptx loaded PLGA submicron particles were formulated by a single emulsification method. PLGA submicron particles were conjugated with alpha fetoprotein third domain (rAFP3d) via standard carbodiimide technique. The obtained conjugate was analyzed using 1525 binary pump and 2487 UV–VIS detector system (Waters, USA) and Reprosil ODS C-18 analytical column with the dimensions of 150mm×4.6mm ID×5μm (Dr. Maisch GmbH, Germany). Sample preparation method was developed utilizing guard cartridge with С18 stationary phase (Phenomenex, USA). HPLC method was validated according to the international conference on harmonization guidelines.

Efficient sample preparation was achieved using 4% of DMSO pre-dissolution, following by 10min of centrifugation at 4500g. Ptx determination was performed using acetonitrile/0.1% phosphoric acid (50:50 v/v) mobile phase at a flow rate of 1.0mL/min, injection volume of 10μL, and at 227nm. The developed method showed linearity, accuracy and precision in the range from 0.03 to 360μg/mL, with LOD and LOQ values of 0.005 and 0.03μg/mL, respectively. The intra- and inter-day precisions presented RSD values of lower than 2%.

The validated method was successfully applied to calculate Ptx encapsulation efficacy and drug loading in the developed formulation.

Le but de cette étude était de développer une méthode de préparation d’échantillons et de valider la méthode HPLC pour la détermination précise du paclitaxel (Ptx) dans des particules submicroniques PLGA conjuguées à une molécule de vecteur protéique.

Des particules submicroniques PLGA chargées de Ptx ont été formulées par une seule méthode d’émulsification. Les particules submicroniques PLGA ont été conjuguées avec le troisième domaine de l’alpha foetoprotéine (rAFP3d) via la technique standard de carbodiimide. Le conjugué obtenu a été analysé en utilisant une pompe binaire 1525 et un système de détection UV-VIS 2487 (Waters, USA) et une colonne analytique Reprosil ODS C-18 avec des dimensions de 150mm×4,6mm DI×5μm (Dr. Maisch GmbH, Allemagne). La méthode de préparation des échantillons a été développée en utilisant une cartouche de garde avec une phase stationnaire С18 (Phenomenex, USA). La méthode HPLC a été validée conformément à la conférence internationale sur les directives d’harmonisation.

Une préparation efficace des échantillons a été obtenue en utilisant 4 % de pré-dissolution de DMSO, après 10min de centrifugation à 4500g. La détermination du Ptx a été réalisée en utilisant une phase mobile acétonitrile/0,1 % d’acide phosphorique (50 :50 v/v) à un débit de 1,0mL/min, un volume d’injection de 10μl et à 227nm. La méthode développée a montré une linéarité, une précision et une précision comprises entre 0,03 et 360μg/mL, avec des valeurs LOD et LOQ de 0,005 et 0,03μg/mL, respectivement. Les précisions intra- et inter-journalières présentaient des valeurs RSD inférieures à 2 %.

La méthode validée a été appliquée avec succès pour calculer l’efficacité d’encapsulation de Ptx et la charge de médicament dans la formulation développée.