Un variant inédit (p.Lys25*) dans le gène SUPT20H a été identifié dans une forme familiale de polyarthrite rhumatoïde (PR). Le gène SUPT20H code pour une protéine agissant sur la régulation transcriptionnelle avec un effet régulateur négatif sur la différenciation en macrophages. Cette protéine serait aussi impliquée dans l’autophagie, le stress du réticulum endoplasmique et le cycle cellulaire. Ce projet visait à étudier l’évolution des expressions géniques et protéiques de SUPT20H et des protéines interagissant avec SUPT20H, dans les monocytes et les macrophages lors de la modulation de l’autophagie.

Nous avons travaillé avec la lignée cellulaire monoblastique humaine U937 non différenciée. Par la suite, les cellules U937 ont été différenciées en macrophages sur 3jours avec le phorbol myristate acétate. L’autophagie a été stimulée in vitro, avant et après la différentiation, par une privation de sérum 24heures avant la lyse cellulaire et en utilisant 100nM de rapamycine 4heures avant la lyse. L’autophagie a été inhibée, avant et après la différentiation, avec 100nM de bafilomycine A 4heures avant la lyse cellulaire. Nous avons quantifié par qRT-PCR l’expression de l’ARNm de SUPT20H, avant et après la différenciation macrophagique dans différences conditions de modulation de l’autophagie. Des Western blots ont quantifié les protéines SUPT20H, p38, p21 et GCN5, avant et après la différentiation et dans différentes conditions de modulation de l’autophagie. L’analyse des variables continues a été effectuée par des tests ANOVA suivis de post-tests de Tuckey. Une valeur p<0,05 a été considérée comme statistiquement significative.

Dans les cellules U937 non différenciées, on a observé une augmentation significative de l’ARNm de SUPT20H en présence de bafilomycine versus en l’absence de modulation de l’autophagie (p=0,0001). Aucune variation significative de l’expression des protéines SUPT20H, p38 et GCN5 n’a été observée lors de la modulation de l’autophagie dans les cellules U937 non différenciées. Au décours de la différenciation macrophagique, on a observé une augmentation significative de l’ARNm de SUPT20H en présence de bafilomycine versus en l’absence de modulation de l’autophagie (p=0,003). Bien que les expressions protéiques de SUPT20H, p38 et GCN5 n’aient pas varié significativement lors de la modulation de l’autophagie dans les macrophages, nous avons observé une surexpression statistiquement significative de la protéine p21 en présence de bafilomycine (p=0,05).

La surexpression de l’ARNm de SUPT20H lors de l’inhibition de l’autophagie est consistante avec le fait que SUPT20H soit requise lors de l’autophagie. La surexpression moindre de SUPT20H dans les cellules différenciées sous bafilomycine pourrait s’expliquer par la baisse de l’ARNm de SUPT20H lors de la différenciation macrophagique. La surexpression de la protéine p21 lors de l’inhibition de l’autophagie pourrait stimuler l’inflammation.

L’inhibition de l’autophagie dans la lignée monocytaire/macrophagique induit une surexpression de l’ARNm de SUPT20H et une surexpression de la protéine p21, dont l’impact biologique sur l’inflammation dans ces cellules devra être précisé.