La fibrose pulmonaire idiopathique (FPI) est la pneumopathie infiltrante diffuse idiopathique la plus fréquente et la plus grave. Environ 10 % des cas de FPI sont associés à des cas familiaux. Les variants hétérozygotes prédits délétères du gène « poly(A)-specific ribonuclease » (PARN) sont parmi les variants les plus fréquemment associés à des cas familiaux de fibrose pulmonaire familiale. Les phénomènes biologiques reliant les variants de PARN et le développement de la fibrose demeurent inconnus. L’objectif de ce travail est de tester l’impact de variants de PARN, prédits délétères et associés à des cas de fibrose pulmonaire, sur la fonction de PARN.

L’ADN complémentaire (ADNc) correspondant aux variants identifiés chez les patients a été généré. Le transfert de gène par lentivirus a été utilisé pour assurer l’expression stable de l’ADNc de PARN sauvage (WT) ou mutant dans une lignée cellulaire n’exprimant pas PARN (HT1080 PARN KO). Dans ces cellules, l’impact des variants sur la fonction de PARN a été évaluée.

Nous avons étudié cinq patients atteints de fibrose pulmonaire issue de trois familles. P1 et P2 sont hétérozygotes pour le variant c. 937 G>T (p. E313*). P3 et P4 sont hétérozygotes pour le variant c. 1635delC (Y546Tfs19). P5 est hétérozygote pour le variant c. 1107TÀ (p. Y369). Pour définir l’impact des variants de PARN identifiés chez P1 à P5 sur la fonction de PARN, nous avons évalué l’expression de TERC dans des cellules HT1080PARN KO transduites avec l’ADNc de PARN sauvage ou codant ces variants. Après au moins 72heures de culture en présence de doxycycline, l’ARNm a été extrait des cellules transduites, et le niveau de TERC a été évalué par PCR quantitative. Nos résultats préliminaires suggèrent une concentration de TERC plus faible dans les cellules transduites avec Q254* (contrôle négatif), par rapport aux cellules transduites avec l’ADNc PARN WT. Nous avons également observé des concentrations plus faibles de TERC dans les cellules transduites avec E313*, pY369* et Y546Ts19, par rapport aux cellules transduites avec l’ADNc PARN WT. Ces résultats suggèrent que les variants E313*, Y546Ts19 et pY369*, trouvés à l’état hétérozygote chez P1, P3/P4 et P5 respectivement, sont associés à une perte de fonction de PARN.

Les résultats obtenus au cours de ce projet sont à la base d’un travail de recherche translationnelle visant à développer un modèle pré-clinique de fibrose pulmonaire associée au défaut AD de PARN. Ce modèle nous permettra de comprendre la physiopathologie la fibrose pulmonaire associée au défaut autosomique dominant de PARN et de développer des traitements spécifiques et curatifs pour les patients.