Le cancer du sein triple-négatif (CSTN) est le sous-type le plus agressif. L’identification précoce des patientes résistantes à la chimiothérapie néoadjuvante peut permettre une réadaptation thérapeutique et ainsi améliorer leur pronostic. Depuis plusieurs années, les nanobodies (VHHs) sont apparus comme une alternative aux anticorps conventionnels et montrent un fort potentiel pour l’imagerie nucléaire. L’objectif de ce projet est de développer un nouveau radioligand de type nanobody, radiomarqué par le Technétium-99m, ciblant l’Human Epidermal growth factor Receptor 3 (HER3), récepteur impliqué dans les mécanismes de résistance des CSTN à la chimiothérapie néoadjuvante. La production des VHHs a été réalisée par la société Caminnov. L’immunisation des camélidés a été induite par injection de protéine recombinante HER3-Fc (R&D Systems) ou de fragments membranaires de cellules HEK293 transfectées avec la protéine recombinante HER3-Fc. La sélection des VHHs a été réalisée sur cinq lignées cellulaires avec différents niveaux d’expression du récepteur HER3 : MCF-7, MDA-MB-468, MDA-MB-231, SkBr3 et CHO. L’affinité des VHHs pour HER3 a été mesurée par cytométrie de flux (CMF) et par test ELISA avec présence ou non de neuréguline (R&D systems). En parallèle, la faisabilité du radiomarquage des tags histidines, présents sur l’extrémité C-terminale des VHHs, par le Technétium-99m a été réalisée grâce à l’utilisation du complexe [99mTc(H2O)3(CO)3]+. Sur 13 VHHs produits, un seul a montré une affinité pour les cellules exprimant HER3 en présence ou non de la neuréguline par CMF. L’analyse des tests ELISA réalisés sur ce VHH a mis en évidence une affinité plus importante pour la lignée cellulaire exprimant HER3 (KDMCF-7=0,027) comparativement à la lignée n’exprimant pas HER3 (KDCHO=0,078). Les études de radiomarquage avec le [99mTc(H2O)3(CO)3]+ ont permis d’obtenir 2 VHHs avec des rendements d’environ 90 % sans purification et 2 VHHs avec des rendements de 20 et 25 % avec purification sur colonne d’exclusion stérique NAP-5. Ils ont tous été obtenus avec une pureté radiochimique >90 %. Ces résultats préliminaires confirment la possibilité de produire et de radiomarquer des naonobodies ciblant HER3. Des études complémentaires de résonnance plasmonique de surface sont en cours pour évaluer la spécificité du VHH sélectionné par rapport aux autres membres de la famille HER. Support : Ligue régionale contre le cancer, I-site Clermont.