Le dosage du 21-désoxycortisol est effectué par immunocompétition après extraction suivie d'une chromatographie sur célite. À l'égal de la 17-hydroxyprogestérone, le 21-désoxycortisol permet le diagnostic de l'hyperplasie congénitale des surrénales par déficit en 21-hydroxylase. Le dosage du 21-désoxycortisol dans le plasma après stimulation par le Synacthène^® présente un intérêt majeur (contrairement à la 17-hydroxyprogestérone) dans le dépistage des hétérozygotes du déficit en 21-hydroxylase (maladie autosomique récessive). Les concentrations plasmatiques du 21-désoxycortisol chez les hétérozygotes dépassent les valeurs-seuils de 1,44 nmol/l ou 2,02 nmol/l selon les auteurs. Le dépistage par le dosage du 21-désoxycortisol après Synacthène^® puis sa confirmation par biologie moléculaire sont justifiés chez le conjoint d'un sujet porteur d'une lésion sévère du gène de la 21-hydroxylase (lésion responsable d'une forme classique avec ou sans perte de sel), en vue d'un diagnostic prénatal. Le dosage du 21-désoxycortisol après Synacthène^® est également prescrit dans l'exploration des hirsutismes et celle des prématurés pubarches. Le dosage du 21-désoxycortisol de base est peu informatif et ne doit pas être prescrit seul.